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비디오 S9. TFEB는 ML162로 처리된 모든 세포에서 활성화되지만, 세포 사멸 양상에 따라 활성화 속도가 다릅니다(그림 5 참조).
이미지는 TFEB-GFP를 발현하는 MCF10A 세포가 GPX4 억제제 ML162 처리에 따른 괴사 및 세포자멸 반응을 나타낸다. 왼쪽 이미지는 DIC를, 오른쪽 이미지는 TFEB-GFP(녹색) 및 Sytox orange(빨간색) 형광을 보여준다. 화살표는 그림 5D 에 나타난 세포를 가리킨다 . 이미지는 10분 간격으로 촬영되었다.
카스파제 억제는 세포사멸을 억제하고 괴사를 증가시키지 않습니다.
이질적인 집단 규모의 세포 사멸 반응을 더 자세히 알아보기 위해, 리소좀 파열과 관련이 없는 세포 사멸(아폽토시스)이 차단될 경우, 리소좀 스트레스가 시간이 지남에 따라 세포 집단에서 괴사성 사멸을 더 많이 유발할 수 있다는 가능성을 고려했습니다. 이를 조사하기 위해, 카스파제 억제제인 ​​zVAD-fmk로 세포를 처리하고 장기간 타임랩스 이미징을 통해 사멸률과 형태학적 특징을 정량화했습니다. 그림 5F 에서 볼 수 있듯이 , zVAD-fmk 처리는 세포 사멸을 겪은 세포의 비율을 유의하게 감소시켰지만, 24시간 동안 괴사율을 증가시키지는 않았으며 전체적인 사멸률을 감소시켰습니다. 흥미롭게도, ML162와 zVAD-fmk로 처리한 세포에서 GFP-Gal3 이미징을 통해 시간이 지남에 따라 생존 세포에서 파열된 리소좀이 나타나는 것을 관찰할 수 있었습니다( 그림 5G ; 비디오 S10 ). GFP-Gal3 점의 수를 정량화하여 나타낸 세포당 파열 횟수는 생존 가능하고 세포사멸이 억제된 세포에서 괴사를 겪은 세포에 비해 유의미하게 낮았습니다( 그림 5G ). 이는 GPX4 억제 세포의 이질적인 운명이 리소좀 스트레스 수준의 차이와 밀접하게 관련되어 있으며, 세포사멸 세포는 괴사와 관련된 리소좀 파열 수준에 도달하지 않는다는 것을 다시 한번 시사합니다.